低温诱导植物染色体数目的变化
实验原理：
进行正常有丝分裂的植物分生组织细胞，在有丝分裂后期，染色体的着丝点分裂，子染色体在纺锤丝的作用下分别移向两级，最终被平均分配到两个子细胞中。用低温处理植物分生组织细胞，能够抑制纺锤体的形成，以致影响染色体被拉向两极，细胞也不能分裂成两个子细胞，于是植物细胞染色体数目发生变化。
实验目的：
学习低温诱导植物染色体数目变化的方法；理解低温诱导植物细胞染色体数目变化的作用机制。
实验材料：
洋葱根尖、培养皿、冰箱、酒精、冰醋酸、蒸馏水、剪刀、镊子、改良苯酚品红（改良苯酚品红染液的配制：母液A： 取3 g 碱性品红， 溶解在100 mL 的70%乙醇（可长期保存）；母液B： 取母液A 10 mL， 加入90 mL 的5%苯酚水溶液（2 周内使用）；取B 液45 mL,加入6 mL 冰醋酸和6 mL 37%甲醛，此为苯酚品红染色液；改良苯酚品红：取10 mL 苯酚品红染液，加入90 mL 的45%冰醋酸和1.8 g 山梨醇即可）
实验步骤：
1 洋葱根尖的培养
1.1 实验过程中经常会遇到洋葱发根少的问题，主要原因在于洋葱收获后有一个自然休眠期。实验时采用将洋葱鳞茎预先低温处理一段时间的办法，可以打破洋葱的自然休眠期，很好地促进了洋葱的发根。
具体方法是发根前将洋葱鳞茎置于冰箱冷藏室（4℃左右）中放置4～7 d。从冰箱取出鳞茎后，剥去外层干鳞片，稍削去根基部的老根，洗净后置于盛满清水的烧杯或广口瓶上，水以浸没根基部为宜。25℃左右下约3～4 d 根基部即长出了大量1～2 cm 长的根，一般有20 根左右， 这样一个班学生正常准备4 个洋葱就足够实验。经过摸索，笔者还发现在洋葱鳞茎底部中央加挖一小洞，可以促进根的生长速度。
1.2 在实验课前3～4 d，将洋葱放在25℃的恒温培养箱培养，待长出l cm 左右的根时，将材料移入4℃冰箱中，继续诱导培养24～36 h。这样，便可以在之后的镜检中明显看出细胞中染色体数目增加，并且有较多处于中期和后期的细胞分裂相。
2 取材、固定
有关取材的时间，因不同的季节、温度及光照时间等条件而有所不同，通常洋葱根尖在上午11时左右细胞分裂旺盛。低温诱导完成后剪取约0.5 cm 长的根尖，取材后可立即放入解离液解离，也可先用卡诺氏液（无水酒精∶冰醋酸=3∶1，宜现配现用）固定5 min。若实验安排在其他时间， 可将剪取的根尖用卡诺氏液固定2 h 左右，然后经95%酒精10 min→85%酒精10 min→70%酒精处理，将上述处理过的根尖4℃保存于70%酒精中，一年内均可用于实验。
3 解离
解离的目的在于使细胞相互分开，适当延长解离时间有助于细胞分开（特别是在实验温度较低时要注意这一点）， 考虑到一节课时间限制，解离时间以10 min 为宜，气温过低时适当再延长解离时间或提高解离温度。解离液置于斜放的小培养皿中，或置于小指管中可节省药液，期间轻摇几次。解离后的根尖分生区呈乳白色，约针孔大小。
4 漂洗
漂洗最好用蒸馏水，除了洗去解离液防止解离过度外，也可起到低渗作用，使细胞体积有一定的膨胀，便于以后染色体形态的观察。漂洗3 遍，每遍2～3 min。
5 染色、压片
将处理好的根尖放在载玻片上，用刀片切取根尖乳白色分生区部分，用镊子尽量捣碎（带少量蒸馏水，起到低渗的作用，不可过多以免冲稀染色液），滴上1 滴改良苯酚品红染液，染色5 min 左右。要注意的是， 改良苯酚溶液配成后可立即使用，但着色能力较差，一般在配制2 周后染色能力显著增强。用镊子夹起充分润湿的盖玻片， 倾斜45°角左右， 使盖玻片基部接触载玻片中溶液并先推后拉使液体散开，最后缓缓地盖上，使气体从一侧排出。在盖玻片上面铺上吸水纸，用拇指垂直压片，稍用力。用力不可太轻，否则细胞分散不好。也可在压片后再用铅笔橡皮头围着根尖材料的四周垂直轻轻敲击（操作时要防止盖玻片与载玻片间发生滑动)，使染色液振动促使材料呈雾状均匀分散。将制成的装片镜检即可观察到明显的染色体数量增加的现象，处于中期和后期的分裂相明显增多。
讨论：
1. 低温诱导植物细胞染色体数加倍的原理是什么？
2. 如果染色时不用改良苯酚品红染液，还可以用什么染色剂呢？
3. 如果不进行漂洗步骤实验结果会怎样？
编者：徐美玉